V prostorách chudobince Jurovského působilo muzeum až do roku 1926. V tomto roce se novým správcem stal profesor kyjovského gymnázia Ludvík Kalus, jehož přičiněním se sbírky během let 1926 – 1928 postupně stěhovaly do budovy zámečku. V nových prostorách bylo muzeum pro veřejnost znovu otevřeno 20.5.1928. Profesor Ludvík Kalus byl správcem muzea až do roku 1955. Zasloužil se především o vybudování archeologické sbírky. Po roce 1955 působil v muzeu i nadále jako vedoucí studijní knihovny a současně jako konzervátor pro historické památky na kyjovském okrese.

O rozšíření sbírkového fondu se nemalou měrou zasloužil i muzejní a archeologický spolek, jehož činnost spadá do období od roku 1941 do roku 1952.

V roce 1953 se z muzea městského stává muzeum okresní. Vlivem nového územního uspořádání se kyjovské muzeum včleněno v roce 1964 jako pobočka do Okresního muzea v Hodoníně.

Do 70. let 20. století byly sbírky prezentovány návštěvníkům formou otevřeného depozitáře. V letech 1972 – 1974 proběhla generální oprava zámečku a sbírky byly instalovány do nových expozic. V roce 1975 se pro veřejnost otevřela expozice archeologická a etnografická, v roce 1978 pak expozice přírodovědná a v roce 1979 nakonec stálá výstava Kyjov v minulosti a dnes. V roce 1990 došlo k reinstalaci části etnografické expozice a k úpravě historické výstavy, která byla koncem 20. století přesunuta na chodbu v důsledku neustále se rozšiřující přírodovědné expozice, kam byly zařazeny nové zoologické přírůstky.

Od roku 1904 do dnešních dnů nashromáždilo několik generací muzejních pracovníků více než 40 000 sbírkových předmětů. Součástí sbírek je také cenná knihovna, jejíž základ tvoří vzácné tisky z 15. – 18. století, které původně patřily knihovně piaristického kláštera v Kyjově. Dnes čítá knihovna přes 15 000 svazků. Slouží hlavně pro studijní účely pracovníků muzea, ale nahlédnout do ní mohou i badatelé z řad odborné i laické veřejnosti.

Nová přístavba Vlastivědného muzea v Kyjově

Slavnostním přestřižením pásky ve středu 6. října 2010 v 17.30 hod. byla za přítomnosti hejtmana Jihomoravského kraje Michala Haška, starosty Kyjova Františka Lukla, zástupců projektového ateliéru Projektis, dodavatelské firmy MSO Kyjov a dalších oficiálních hostí
i ostatních návštěvníků z řad veřejnosti oficiálně uvedena do provozu přístavba Vlastivědného muzea v Kyjově. Novostavba se nachází v sousedství budovy renesančního zámečku v Kyjo-vě na Palackého ulici. Je v ní umístěno především technické a administrativní zázemí muzea: depozitáře, konzervátorská dílna, knihovna a pracovny odborných pracovníků muzea. Nové prostory tak nahradí dnes již nevyhovující depozitáře, uvolní se místnosti pro rozšíření stálých expozic v zámečku a muzeum také konečně získá víceúčelový sál pro pořádání přednášek a dalších akcí, který doposud zcela chyběl.