Ferko je aj vášnivý chemik a tak niet divu, že v laboratóriu za svoju kariéru vyviedol mnoho vecí. Počas praktickej výučby o spektrofotometrií dával Ferko svojim študentom tento príklad:
Úlohou študenta je odmerať je absorbanciu u dvoch neznámych vzoriek a stanoviť koncentráciu za pomoci 7 štandardov o známej koncentrácií. Koncentrácia a absorbancia štandardov je uvedená v nasledujúcej tabuľke.
Absorbancia u neznámych vzoriek bola:
Avz1: 203,75
Avz2: 162,5
V nasledujúcom grafe sú nanesené hodnoty štandardov:
Pomocou uvedených hodnôt vypočítať koncentráciu neznámych vzoriek, výsledok vynásob 100 a máš finálne súradnice.
N 48° 55, Cvz1 E 018° 05, Cvz2
Spektrofotometria je analýza založená na meraní absorpcie žiarenia vlnovej dĺžky, ktorá sa pohybuje od 200 nm do 800 nm. analýza je založená na Lambertovom- Beerovom zákone, podľa ktorého ak prechádza monochromatické žiarenie, ktorého žiarivý tok je Ф0, absorbujúcim prostredím hrúbky I zoslabí sa tento žiarivý tok na hodnotu Ф. Stanovovaná látka musí byť farebná alebo reakciou dáva farebný produkt.
Pre každú známu hodnotu koncentrácie štandardného roztoku sa odmeria príslušná hodnota absorbancie a zostrojí sa kalibračná krivka. Táto závislosť je priamková pre určenú rozsah koncentrácie.
Pre stanovenie musí platiť:
- Farebné reakcie musia byť dostatočne citlivé, aby bolo možné zistiť malé koncentrácie stanovovanej látky.
- Musia byť selektívne (výber), aby činidlá v reakciách reagovali len zo stanovovanou látkou (ak to tak nie je, musíme niektoré zložky: separovať, maskovať )
Spektrometricky možno merať pH, určiť stechiometrické zloženie komplexov, sledovať procesov oxidačno-redukčnej reakcie.
Stanoviť koncentráciu vzorky je možné viacerými spôsobmi, najpoužívanejšie je na základe grafu alebo pomocou kalibračného faktora, ktorý vypočítame nasledovne:
Čiže súčet všetkých koncentrácií štandardov deleno súčet všetkých absorbancií štandardov. Nameraná absorbancia sa následne násobí vypočítaným faktorom, čím dostanem koncentráciu.
Základný princípom spektrofometrického stanovenia
Roztok, ktorý sa nachádza v meracej kyvete je ožiarený monochromatickým svetlom (vybraná časť elektromagnetického spektra, pri ktorej je najvyššia absorbancia) a svetelné žiarenie je molekulami našej stanovovanej látky absorbované. Detektor umiestnený za kyvetou meria intenzitu dopadajúceho svetla, ktoré nebolo absorbované roztokom – bolo prepustené. Následne spektrofotometer porovnáva množstvo prepusteného svetla s množstvom vysielaného svetla a vyjadruje mieru absorbovaného svetla v analyzovanej látke. Množstvo absorbovaného svetla je úmerné koncentrácií látky v meranom roztoku.